關于印發(fā)新冠病毒核酸篩查稀釋混樣檢測技術指引的通知
聯(lián)防聯(lián)控機制醫(yī)療發(fā)〔2020〕277號
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各省、自治區(qū)、直轄市及新疆生產建設兵團應對新冠肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機制（領導小組、指揮部）：
為指導各醫(yī)療機構做好新冠病毒核酸檢測工作，我們總結了湖北省、武漢市核酸檢測實踐經驗，組織制定了《新冠病毒核酸篩查稀釋混樣檢測技術指引》（可在我委官網“醫(yī)政醫(yī)管”欄目下載）。現印發(fā)給你們，供在新冠病毒核酸大樣本應急篩查中參考使用。
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國務院應對新型冠狀病毒肺炎
疫情聯(lián)防聯(lián)控機制醫(yī)療救治組
（代章）
2020年7月21日
（信息公開形式：主動公開）
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新冠病毒核酸篩查稀釋混樣檢測
技術指引
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一、適用對象
新型冠狀病毒核酸篩查稀釋混樣技術（以下簡稱稀釋混樣）僅適用于大人群樣本的篩查，稀釋混樣檢測結果不作為最終確診依據。在人群總體陽性率較低（低于0.1%）時更為適宜。以下人群不建議采用稀釋混樣檢測：
（一）重點區(qū)域人群（近期有疫情發(fā)生的小區(qū)含確診病例和無癥狀感染者、老舊小區(qū)、人口密集小區(qū)、流動人口聚集區(qū)和近期離省外出人群）、其他不適合稀釋混樣檢測的人群；
（二）醫(yī)療機構就診患者。
二、實驗室條件
（一）根據《病原微生物實驗室生物安全管理條例》（國務院424號令），具備在設區(qū)的市級人民政府衛(wèi)生健康主管部門備案的生物安全二級及以上實驗室。
（二）根據《醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號），具備經過省級衛(wèi)生健康行政部門審核備案的臨床基因擴增檢驗實驗室。
（三）醫(yī)學檢驗實驗室（常稱為第三方實驗室）應當符合《醫(yī)學檢驗實驗室基本標準（試行）》《醫(yī)學檢驗實驗室管理規(guī)范（試行）》等要求。
三、生物安全要求
根據《國家衛(wèi)生健康委辦公廳關于醫(yī)療機構開展新型冠狀病毒核酸檢測有關要求的通知》（國衛(wèi)辦醫(yī)函〔2020〕53號）和《新型冠狀病毒實驗室生物安全指南（第二版）》的有關要求，采樣和實驗室檢測人員應采用生物安全三級實驗室級別的個人防護。檢測工作完成后，廢棄物嚴格按照文件要求處理，不得保存樣本。
四、操作流程
（一）材料準備。
1.采樣管。常規(guī)采樣管，推薦含病毒保存液1～2ml的標準采樣管。
2.咽拭子。
3.振蕩器。
4.其他開展核酸檢測的常規(guī)物質準備。
（二）采樣與混合。
1.咽拭子采樣方法。被采集人員頭部微仰，采樣者將拭子越過舌根，在被采集者兩側咽扁桃體稍微用力來回擦拭至少3次，將拭子頭浸入含1～3ml病毒保存液（也可使用等滲鹽溶液、組織培養(yǎng)液或磷酸鹽緩沖液）的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。
2.樣本混合。將采集的數個樣本（原則上不超過5個）各取200ul進行充分混合，形成混合待檢樣本。
（三）核酸檢測。
核酸提取與檢測過程按有關實驗室常規(guī)標準操作流程進行。每一次上樣擴增中，80個加樣孔用于加入混合樣本（如5混1，總計80×5個單樣本）；10個加樣孔用于單樣本（單樣本來自上述80×5個原液的隨機樣本）。
（四）陽性結果判斷與重測。
1.檢測結果先按照各檢測試劑盒使用說明書的要求，對被檢測基因位點逐一判定，出現任一位點陽性或能測出Ct值的混合樣本，均作為重測對象。
2.混合樣本檢出Ct值，其所有的單個原液樣本需重新取樣，按照常規(guī)方法進行單樣本核酸檢測。
3.單樣本檢出陽性，其所在混合樣本要全部按常規(guī)方法進行單樣本核酸檢測。
五、質量控制
（一）室內質控。每批上樣檢測應當在剩余加樣孔中設置1個弱陽性質控樣本和三個陰性質控樣本（2份生理鹽水和1份陰性混合樣本）。3份陰性質控樣本隨機放在臨床樣本中間。弱陽性質控測定為陽性，3個陰性質控全部測定為陰性，視為在控。反之，則為失控，不可發(fā)出報告，應分析原因，必要時重新檢測樣本。
（二）室間質評。實驗室應參加省級及以上臨床檢驗中心組織的室間質量評價（EQA）活動，按照活動要求完成質評物接收、儲存、檢測和回報檢測結果等工作。
六、注意事項
（一）注意避免采樣過程中的交叉污染，落實一人一消毒；混樣室在每進行一批樣本稀釋混樣操作后，應進行消毒處理。
（二）拭子應完全浸潤在病毒保存液中，樣本在混合前后充分震蕩（在振蕩器上振蕩30秒）。
（三）稀釋混樣檢測必須提取核酸，禁用“一步法”。
（四）建議對試劑檢測靈敏度進行評估，應選擇靈敏度較高的檢測試劑。
（五）稀釋混樣檢測的陰性樣本按每批次擴增留取一份陰性樣本備查。
（來源：國家衛(wèi)生健康委）
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